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空肠曲折菌的活化与收藏

宣布时候: 2022-03-26

空肠曲折菌(Campylobacter jejuni)是一种能够引发人类急性肠炎和食物中毒的人畜共得病原菌。该菌培育前提刻薄,成长须要特定的情况,菌株不易保管。凡是在微需氧(5%氧气、85%氮气、10%二氧化碳)、42±1℃情况下,可存活4~5d,最初因培育基外表枯燥而致使菌体枯燥灭亡。


空肠曲折菌的活化与收藏


一、空肠曲折菌的活化体例


1.配制曲折菌活化肉汤


空肠曲折菌的活化与收藏


a. 将各成份溶于蒸馏水中,颠末0.22μm滤膜过滤除菌。FBP 按照须要量现用现配,在-70℃贮存不跨越3个月或-20℃贮存不跨越1个月。


b. 裂摆脱纤维羊血提早从-70℃冰箱掏出规复至室温。


c. 称取CM125布氏肉汤并消融灭菌,灭菌后冷却至室温。每100ml根本插手5ml裂摆脱纤维羊血和0.5ml FBP溶液,分装试管,即制备实现。

空肠曲折菌的活化与收藏


2.肉汤培育

从-70℃冰箱掏出曲折菌冻存甘油管,倾倒至曲折菌活化肉汤中。置于厌氧培育罐中,插手微需氧产气袋于42℃培育24h。


3.平板培育

取10ul肉汤培育物划线至哥伦比亚血平板(PB003A),42℃微需氧培育44±4h,察看菌落形状。典范菌落为灰色、扁平、潮湿有光芒,呈沿接种线向外分散的偏向。

空肠曲折菌的活化与收藏


4菌株考证

经由过程菌落形状和生化尝试对菌株停止考证,确认后停止菌株收藏。

 

二、空肠曲折菌的收藏体例


1.双倍布氏肉汤甘油保管管束作:称取5.62g CM125布氏肉汤干粉,溶于70ml蒸馏水、30ml甘油中,灭菌后冷却至室温,插手5ml裂摆脱纤维羊血、0.5ml FBP溶液,混匀后分装到冻存管中,每管1ml。


空肠曲折菌的活化与收藏


2. 利用接种环刮取哥伦比亚血平板上的纯菌落(尽能够多)至冻存管中,涡旋震动5s,于-70℃持久保管。



三、注重事变


01

不倡议利用磁珠管收藏曲折菌,存活率不如甘油冻存管。

02

-20℃保管的结果不如-70℃冰箱,若是利用-20℃保管,应半年停止一次传代。

03

若是短时间保管,可将厌氧罐同试管/平板放入2-8℃冰箱,一礼拜内利用。



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MSS样本办理体系扫码装配及公用冻存管


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参考文献:

1.        陈晶晶.曲折菌肠炎[J].中华风行病学杂志, 1986, 7 (4) :245-249

2.        栾军, 祝长青, 蒋原, et al..空肠曲折菌保管体例的比拟[J].港口卫生节制, 2006, 12(4):15-17.

3.        栾军, 祝长青, 蒋原, et al. 空肠曲折菌挑选性增菌培育和分手体例的比拟[J]. 中国人兽共得病学报, 2008, 24(002):117-119.

4.        GB4789.9-2014 食物宁静国度规范 食物微生物学查验 空肠曲折菌查验[S].




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